أنواع أفلام الدم المستخدمة لفحص طفيل الملاريا :

هناك نوعان من الأفلام يستعملان في التشخيص المجهري للملاريا: فيلم سميك وفيلم رقيق.

الفيلم الرقيق:
يتكون من طبقة واحدة من كريات الدم الحمراء ويستفاد منه في معرفة نوع طفيلي الملاريا بعد أن يشاهد أولاً في الفيلم السميك. كذلك يستخدم هذا الفيلم للكتابـة على الشريحـة حيث يكتب فيـه اسـم ورقم المريض.

الفيلم السميك :
يتكون من عدد كبير من كريات الدم الحمراء التي أزيل عنها الهيموغلوبين. يتم تركيز الطفيليات في مساحة أقل في الفيلم السميك مما يمكِّن من العثور عليها بسرعة مقارنة بالفيلم الرقيق.

تحضير الأفلام السميكة والرقيقة في نفس الفيلم:

المستلزمات الآتية مطلوبة لتحضير أفلام الدم :
• شرائح زجاجية منظِّفة ومغلّفة.
• مفاصد معقّمة.
• كحول مثيلي وماء.
• قطن ماص.
• صناديق شرائح ( أو غطاء يقي الشرائح من الغبار و الذباب).
• قماش قطني نظيف خالي من النسالة.
• نماذج تقارير أو سِجِل للمرضى .

طريقة اخذ عينات الدم وتحضير أفلام الدم السميكة والرقيقة لاحظ أنه بالرغـم مـن أن الفيـلم السميـك والفيلم الرقيق المأخوذين من نفس الشخص يمكن تحضيرهما في نفس الشريحة إلا أنه من غير المستحب الجمع بين أفلام لأكثر من شخص واحد في نفس الشريحة.
الفحص الروتيني لأفلام الدم للبحث عن طفيليات الملاريا
فحص الفيلم الرقيق :
بما أن فحص الفيلم الرقيق يستغرق عشر أضعاف الوقت الذي نحتاجه لفحص الفيلم السميك لذا لا يوصى بالفحص الروتيني للفيلم الرقيق حتى أن فني المختبر المتمرس لايقوم بفحص الأفلام الرقيقة إلا نادراً اثناء عمله اليومي ومع ذلك فإن فحص الفيلم الرقيق يوصى به في الحالات الآتية:
• عندما يتعذر فحص الفيلم السميك لصغره أو لأنه قد تثبت قبل الصبغ أو أصبح غير صالح لأسباب أخرى.

• للتأكد من نوع طفيلي الملاريا.
وعند وجود ضرورة لفحص الفيلم الرقيق لا بد أن يتم بطريقة منهجية وثابتة كالآتي:
الخطوة 1: ضع الشريحة في المسرح الميكانيكي
الخطوة 2: صوب العدسة الزيتية ×100 فوق طرف حافة الفيلم الخطوة 3 : ضع قطرة زيت غطس في حافة وسط الشريحة.
الخطوة 4 : اخفض العدسة الزيتية إلى أن تلمس زيت الغطس .
الخطوة5 : افحص الفيلم متبعا نمط الحركة الموضح في الرسم وذلك بالتحرك أفقيا على طول الفيلم إلى نهايته ثم التحرك رأسياً مسافة حقل واحد ومن ثم التحرك أفقياً على طول الفيلم في الاتجاه المعاكس للتحرك الأفقي السابق واستمر على هذا المنوال.
الخطوة 6 : اكمل فحص حوالي 100 حقل قبل تسجيل النتيجة بأن الفيلم سالب أو موجب من حيث وجود طفيليات الملاريا. لو كان هناك شك في التشخيص فيمكن زيادة الفحص لما قد يصل إلى 400 حقل.

فحص الفيلم الرقيق

فحص الفيلم السميك:

عادة يتم فحص الملاريا في الأفلام السميكة. من الممكن التعرف على نوع الملاريا في
الفيلم السميك إذا كان الفيلم قد تم تحضيره جيداً ولم يتثبت قبل الصبغ. لكن أحياناً قد تجد صعوبة في التمييز بين أتاريف الملاريا النشيطة الناضجة وعرسياتها، أتاريف الملاريا الوبالية وعرسيات الملاريا المنجلية المتكوِّرة، أيضا قد لا يكون من الممكن التمييز بين أتاريف وعرسيات الملاريا الوبالية. في الفيلم السميك من الناحية العملية تقتصر أهمية إثبات وجود عرسيات الملاريا في الدم على عدوى المتصورة المنجلية وهذا التشخيص يعتبر سهلاً نسبياً في الفيلم السميك.
الفحص الروتيني للفيلم السميك يحدد بمئة حقل, أي أنه لا يمكن الحكم بأن الفيلم سالب للملاريا إلا بعد أن يتم فحص 100 حقل بدون مشاهدة أي طفيليات ملاريا.
لو و جدت طفيليات فيجب فحص 100 حقل إضافية لتحديد نوع الطفيلي. هذه الطريقة تقلل من إغفال العدوى المختلطة( بأكثر من نوع واحد).

طريقة فحص الفيلم السميك:

• الخطوة 1: افحص الفيلم مستعملاً الشيئية×40 وذلك لاختيار المكان المناسب من الفيلم وهو مكان صُبـِغ جيداً وتقل فيه الشوائب وبه عدد جيد من كريات الدم البيضاء.
• الخطوة 2: ضع زيت الغطس في الفيلم السميك.
• الخطوة 3: لف العدسة الزيتية ×100 وصوبها فوق المكان المختار من الفيلم.
• الخطوة 4: أخفض الشيئية ( أو أرفع المسرح ) حتى تلامس الشيئية نقطة الزيت.
• الخطوة 5: تأكد من صلاحية المكان المختار للفحص واستمر في الفحص حتى تكمل 100 حقلاَ تحت عدسة الغطس بنفس النمط المبين في الشكل. تذكر أن تستعمل زر التعديل الدقيق في المجهر.
• الخطوة 6: يمكن استعمال جهاز عدَ يدوي للمساعدة في عدَ الحقول أثناء فحصها. ستستخدم هذه الطريقة فيما بعد لمساعدتك في تحديد كثافة الطفيليات كما سيتضح في تمرين لاحق.

فحص فيلم الدم السميك


بعد الانتهاء من الفحص ينبغي أن تدون نتيجة الفحص في نموذج التقرير المناسب. "ومن المحتمل أن تتضمن النتيجة عدَ الطفيليات خاصة في حالة الملاريا المنجلية"

عدَ طفيليات الملاريا في الدم:
من الضروري أن تتمكن من عدَ الطفيليات في فحص الملاريا للأسباب الآتية:
• قد يود الطبيب المعالج أن يقـدِّر مدى شدة المرض.
• قد يود الطبيب المعالج للمريض أن يتتبع مدى استجابة الطفيلي للعلاج. ويتم ذلك بمقارنة عدد الطفيليات في الدم قبل العلاج وفي فترات معينة بعد العلاج.
• عدَ الطفيليات مهم في علاج ومتابعة حالات الإصابة بالمتصورة المنجلية إذ أنها قد تزداد وخامة وتكون مميتة.
• عدَ الطفيليات قد يساعد السلطات الصحية بتوفير أحد المؤشرات لشدة حالات الملاريا في المنطقة .
• قد يُطلب القيام بعدَ الطفيليات لأغراض خاصة ،مثال لذلك تقدير مدى استجابة الطفيلي لأدوية الملاريا.
لا تبدأ عدَ الطفيليات إلا بعد أن تكون قد أكملت فحص المئة حقل وتعرفت على أنواع وأطوار الطفيلي في الفيلم.
هناك طريقتان لعدَ الطفيليات :
الطريقة الأولى عدَ الطفيليات في مليلتر الدم:
هذه طريقة عملية وذات درجة مقبولة من المضبوطية ( الدقة). عدد الطفيليات في الميكرولترمن فيلم الدم السميك تحسب مقابل عدد معياري ثابت من كريات الدم البيضاء(8000) (و ذلك بافتراض أن عدد الكريات البيضاء في كل شخص هو 8000 كرية / ميكرولتر). بالرغم من وجود بعض التفاوت في عدد كريات الدم البيضاء في الأشخاص الأصحاء, ووجود تفاوت أكبر بين المرضى إلا أن استخدام هذه الطريقة يمكّـن من عمل مقارنات معقولة. ستحتاج لجهازي عدَ يدوي ، أحدهما لعدَ الطفيليات والآخر لعدَ كريات الدم البيضاء.
الخطوة 1:
• إذا وجدت 10 طفيليات أو أكثر مقابل عدَ 200 كرية دم بيضاء فيمكن أن تسجل هذا العدد في نموذج التقرير على أنه عدد الطفيليات لكل 200 كرية دم بيضاء.
• إذا وجدت 9 طفيليات أو أقل من ذلك مقابل عدَ 200 كرية دم بيضاء فاستمر في عدَ الطفيليات وكريات الدم البيضاء إلى أن تصل إلى 500 كرية وبعد ذلك سجل العدد في نموذج التقريرعلى أنه عدد الطفيليات لكل 500 كرية دم بيضاء.
الخطوة 2: في كلتا الحالتين يمكن تحويل عدد الطفيليات مقابل كريات الدم البيضاء إلى عدد الطفيليات في الميكرولتر من الدم بالمعادلة الآتية:
وهذا يعني أنه لو تم عدَ 200 كرية دم بيضاء يتم ضرب عدد الطفيليات في 40 ، وإذا كان قد تم عدَ 500 كرية بيضاء يضرب عدد الطفيليات في 16.
ملحوظة: من العادة عدَ كل أنواع الملاريا الموجودة في الفيلم وأن يتم عدَ وتسجيل عرسيات م. المنجلية بصورة منفصلة. هذه النقطة هامة جداً خاصة عند رصد الاستجابة لأدوية الملاريا المبيدة للمتقسمات في الدم والتي لا يتوقع أن يكون لها أي تأثير على العرسيات ((gametocytes.
الطريقة الثانية : الرمز بعلامات الجمع:
الطريقة الأكثر بساطة لعد الطفيليات في الفيلم السميك هي استعمال نظام علامات الجمع (+) للاستدلال على عدد الطفيليات كما في الجدول أدناه. هذه الطريقة أقلّ دقة من الطريقة الأولى لكن يلجأ لها عندما يتعذر عد الطفيليات كما في الطريقة الأولى.


+ 1-10 طفيليات في 100 حقل فيلم سميك
+ + 11-100 طفيليات في 100 حقل فيلم سميك
+ + + 1-10 طفيليات في الحقل الواحد للفيلم السميك
+ + + + أكثر من 10 طفيليات في الحقل الواحد للفيلم السميك