صبغ البكتيريا ب Gram stain

صبغ البكتيريا ب Gram stain

1- حضر المواد اللازمة للصباغة :

(distilled-water / Iodine / crystal violet / alcohol aceton solution / Safranin /

normal saline / wire loop /slid / Benzen burner / Rack Staining) .

2- عمل مسحة بكتيرية باتباع ما يلي :

-أحضر slide نظبف وأكتب علية اسم المريض على طرفة ، وفي منتصف slide ضع قطرة من Normal- saline .

-أحرق wire loop (تعقيمة) وذلك بابقائة على اللهب حتى يحمر .

-بجانب لهب بنزن أفتح طبق بتري المحتوي على البكتيريا المطلوب صباغتها وأغرس wire loop في ال Agar بمنطقة لا تحتوي على نمو بكتيري ثم أرفعة .

-قم باخذ 2-3 bacteria colony وضعهم على قطرة Normal-saline وأمزجهم جيدا mix ستلاحظ تعكر Normal-saline .

-أحرق wire loop مرة اخرى واعدة لمكانة واترك المسحة لتجف في الهواء .

-تحذير لا يجوز استخدام الحرارة لتجفيف المسحة لأن ذلك يشوة الخلايا المتواجدة.

-اجراء عملية التثبيت Fixation للبكتيريا بواسطة لهب بنزن (الحرارة) وذلك بتمرير slide المحتوي على المسحة فوق اللهب من4 الى 5 مرات .

أن هذة العملية تساعد على تغيير طبيعة الأنزيمات المحللة وذلك بمنع التحلل الذاتي للبكتيريا وكذلك الحرارة تعمل على زيادة ألتصاق الخلايا

بالشريحة وعدم اجراء هذة الخطوة يعني خسارة البكتيريا المتواجدة على slide مع أول غسلة لها (وطبعا تكون المسحة البكتيرية من الأعلى وليسة من جهة اللهب) .

3- عملية الصبغ :

-ضع slide المحتوي على المسحة البكتيرية المطلوب صباغتة على حوض الصباغة (وطبعا الجهة المحتوية على المسحة تكون للأعلى ) .

أولا : اغمر الشريحة بCreystal violet ذو اللون البنفسجي وأتركه لمدة دقيقة واحدة ثم تشطف الشريحة slide بالماءالمقطر distilled water وذلك للتخلص من الصبغة الزائدة .

ثانياً: اغمر الشرحة ب iodine ذو اللون الأصفر وأتركه لمدة دقيقة ثم يشطف بالماء .

ثالثا: اغمر الشريحة ب alcohol acetone solution المحضر بنسبة 1:1 ذو اللون الشفاف المستخدم لأستخلاص الصبغة decolorizer وتترك لمدة 30 ثانية ثم تشطف بالماء المقطر .

تحذير: إذا زادت المدة عن 30 ثانية سوف يؤدي ذلك لظهور نتائج متغايرة وتحديدا سؤدي ذلك لتحول g+ve إلى g-ve.

رابعاً: تغمر الشريحة ب safranin ذو اللون الاحمر الغامق التي تستخدم كصبغة بديلة counter stain وتترك لمدة دقيقة ثم تشطف بالماء المقطر .

خامساً: جفف الشريحة المصبوغة باستخدام ال filter paper ثم أفحص الشريحة على العدسة الزيتية قوة تكبير 100 .

النتائج:

1-تصبغ باللون البنفسجي g+ve .

2-تصبغ باللون الاحمر g-ve

» Gram stain procedure:
» فيديو : صبغ شريحة Gram Stain
» اوساط البكتيريا الزراعية